人胰岛素elisa试剂盒采用的是双抗体夹心法酶联免疫吸附检测技术（ELISA）。测定样品中人胰岛素水平。向预先包被了抗人胰岛素抗体的酶标孔中，加入标准品和样本，温育后，加入生物素标记的抗胰岛素抗体。再与HRP标记的链霉亲和素结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。最后，在450nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，样本中的人胰岛素浓度与OD值成正比，通过绘制标准曲线计算出样本中人胰岛素的浓度。

 

　　人胰岛素elisa试剂盒的使用方法：

　　人胰岛素elisa试剂盒样品收集、处理及保存方法应用双抗体夹心法测定标本水平。用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抗体，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品浓度。

 

　　1、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

　　3、细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4、组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

　　5、保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

　　自备物品：

　　1、酶标仪（450nm）

　　2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3、37℃恒温箱