产品名称：犬肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒

 操作步骤
1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.加酶：每孔加入酶标试剂 100μl，空白孔除外。
4.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。
5.配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用。
6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
7.显色：每孔先加入显色剂A 50μl，再加入显色剂B 50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

犬肿瘤坏死因子α(TNFα)ELISA试剂盒

 注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。样本在使用前也要在室温平衡 60 分钟。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间尽量控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，尽量做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔第one孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。