BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86070-01(10×100ul)/BFNC86070-02(50×100ul)

BL21 Star(DE3)：                                        100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個(gè)月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)

產(chǎn)品說明

BL21 Star(DE3)菌株源于BL21(DE3)菌株，含有rne131突變（RNaseE基因），RNaseE基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累，增強(qiáng)菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性，從而提高異源蛋白的表達(dá)水平。主要適用于T7啟動子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)，同時(shí)含有大腸桿菌RNA聚合酶，也可用于非T7啟動子表達(dá)載體（pGEX，pMAL等）的蛋白表達(dá)。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達(dá)。

青旗生物生產(chǎn)的BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁸cfu/μg DNA。

操作方法

1. BL21 Star(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2.  42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基(2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4.  5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

BL21 Star(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量 在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。